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    TissueGnostics帶您解讀視網膜組織形態學特征及多種結構定量

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    視網膜

    視網膜是眼球中重要的结构之一,它是位于眼球壁内层的一层透明薄膜,周围布满了大量的感光细胞和神经纤维,通过它可以直接接受来自外界环境的光线并在眼球内形成影像,通过神经纤维将影像信息传送至大脑中枢形成视觉。

    其它中枢神经系统内也有小胶质细胞,在健康的視網膜中,神经元和小胶质细胞之间的交流对维持神经元向大脑发送信号的能力非常重要。

    視網膜血管作为人体内可以进行非创伤直接观察的深层微血管,其生理状况的检查对高血压、糖尿病、动脉硬化等心血管疾病的诊断、治疗评价具有重要意义。

    一般而言,眼底图像通常都是通过激光扫描成像进行采集,但是由于眼底可观测的视野往往是很有限的,一个患者的眼底信息需要多张扫描图像才能完全显示出来。这种局限性大大不利于病情进行全面的、细致的诊断。Tissue Cytometry全景组织流式定量分析技术进行全景图像获取,在单细胞、组织结构、细胞空间信息等多个层面进行定位、定性、定量分析。从而更好的对病变区域进行有针对性的跟踪观察和全面分析。

    實驗目的

    視網膜荧光样本中小胶质细胞胞体、神经纤维识别、血管识别、血管斑点识别、神经元与血管的距离分析。

    實驗流程

    1. 利用TissueFAXS系统进行玻片荧光的全景扫描。

    2. 使用StrataQuest分析软件进行定量分析。

    3. 根据FITC通道识别神经胞体并筛选出细胞胞体(细胞核识别算法)。

    4. 膜识别FITC染色信号的区域确定神经纤维,并对不同长度神经纤维进行分类。

    5. 识别血管的Texa Red染色区域面积及强度。

    6. 计算神经元与血管间的空间距离,并统计数量和占比。

    7. 根据毛细血管亮斑的识别结果,统计新生小血管数量。

    實驗過程


    单通道灰阶图(↑:FITC,↓:Texa Red)

    根據染色強度,染色面積,細胞形態學,利用正反向回溯功能和設門圈選Gating,排除雜質,細胞碎片,黏連細胞(綠色框線標記),獲得神經元胞體,(粉色框線標記),並將胞體按照面積分爲兩類(散點圖)。

    由于该視網膜样本是标记的小胶质细胞,根据面积将神经胞体分为两类(Small bodycell,Big bodycell),反向回溯Big bodycell中的细胞后,应用Input Gate功能筛选短粗的神经纤维,作为激活态的小胶质细胞。

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    激活態小膠質細胞識別


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    血管识别:根据Texa Red通道进行识别,并去除面积小的及非同一焦面的血管,仅对确定的清晰的同一焦面的大血管进行面积统计。

    血管與小膠質細胞的距離

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    血管與小膠質細胞的距離0-0.1μm(红色框线标记)

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    血管與小膠質細胞的距離0.1-1μm(粉色标记)

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    血管與小膠質細胞的距離1-3μm(粉色标记)


    此外,Tissue Cytometry散点图-热力图-数据同屏叠加对比功能,可以整合多种数据分析的二维图像,便于研究者们直观的对比与校验;同屏对比功能,不但可以同屏预览,还可以支持多点实时联动缩放,便于观察/分析图像,打通信息分析时数据-图像之间的屏障。


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