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    您的微量分光光度計測蛋白有問題?大概率原因找到了

        微量分光光度计主要用于核酸及蛋白质的浓度测定和纯度评估。然而,在实际应用中,经;岢鱿趾怂峤先菀妆蛔既凡饬,而蛋白质样品的浓度测量偏差较大的情况。很多用户也困惑于此,同样是基于紫外吸收的检测,为何两种样品的检测性能会有差异呢?


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        坊间也时常出现一些说法:微量只能用于测核酸,而蛋白测不准。如果真是这样的话,那么设备的使用率就会大打折扣了。传闻是不可轻信的,我们还是需要了解原因,然后才能找出解决方案。

    先上一組數據看看

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        重复性和稳定性是评判设备性能的好方式,这三台基础型Nanophotometer? N50T机型在正确的操作下,对较低浓度和较高浓度样品的测量,都能够得到一致的结果,CV<0.4%。如果设备性能都如此,那前面所述的问题就不存在了。

    普遍問題:蛋白樣品表面張力的影響


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        蛋白质样品,相较于核酸而言,更容易出现表面张力降低的情况。因此,如果你的微量分光光度计是采用样品拉伸原理的,即形成液柱的方法,对于一些样品而言,是难以进行测量的,这可能是造成测量准确性和重复性不好的大原因。



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    影響因素一:溫度和揮發



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        通常来说,液体的温度升高,由于分子间引力减弱,表面张力会随之降低。这也解释了为何低温保存的核酸样品,张力较大,更易形成液柱。在夏天实验环境较热,或者制药用户的恒温恒湿实验室,温度是相对较高的,张力会随之下降。

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        等一下,不是有空调吗?空调产生的气流会大幅增加微量液体的挥发,暴露在空气中的液柱易受到影响,对测量重复性影响较大。结果就是:房间热易挥发,冷风吹也易挥发。

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    影響因素二:鹽

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        无机盐作为一种非表面活性剂,具有水合作用,趋向于把水分子拖入水中,因此会增大表面张力,反之亦然。因此,脱盐或低盐的样品,表面张力会降低,常见于蛋白纯化的流程。例如在进行蛋白质结构分析或质谱分析时,样品需经过脱盐处理,这样的样品在进行浓度测量时,并不容易形成液柱。

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    影響因素三:表面活性劑

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        蛋白提取过程中经常使用的表面活性剂(清洁剂),如SDS、Triton X100,以及在发酵过程中加入的消泡剂等成份,会大幅降低样品的表面张力(想想看,连维持泡沫的张力都没有了),这些物质;岵辛粼谘局,难以完全去除。因此,在工艺过程中测量蛋白样品,是一项挑战。

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    影響因素四:固液接觸表面

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        当使用移液器将微量样品加载到点样台后,会出现液体与固体的接触表面,点样台表面的亲水/疏水性质会影响液体的表面张力。因此,使用拉伸法的主流品牌微量分光光度计,点样台表面具有疏水性涂层,会增大液体的张力。但是,随着使用损耗,涂层会逐渐消耗,需要定期使用试剂进行维护和再生。在正确的维护之后,这一影响因素也随之消失,但也增加了维护成本,而大多数用户并不知道这一点。

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    這麽麻煩?我還測不測了!

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    九游会在线 換個思維,如果一台微量分光光度計的測量原理,並不依賴于液體的表面張力呢?Implen就可以,采用樣品壓縮技術的Nanophotometer?檢測時無需形成液柱,而是將液滴壓縮爲很薄的液膜。因此,無論核酸、蛋白,都可以使用Nanophotometer?輕松測量。而封閉式的檢測環境,也很好的保護了樣品免受揮發影響。

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        无论是纯化蛋白、总蛋白、结合蛋白、还是肽段样品,Nanophotometer?都有丰富的APP程序和方法学应用,以及我们的技术团队提供的支持,使您在蛋白浓度测量中遇到的问题迎刃而解。

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